765.隐蔽、狡猾、善变 (3-2)

为了更好地了解s的全身分布，我们还研究了s在外周血、脾脏和骨髓中的比例。仅在接种细胞一周后，小鼠外周血中的百分比是无瘤小鼠的两倍，3周后的百分比是无瘤小鼠的5倍。小鼠外周血中s的比例也增加，而s的比例与肿瘤大小无关。

1是肿瘤细胞、s、巨噬细胞和树突状细胞表达的最重要的检查点分子之一。为了确定小鼠s的1表达是否与健康小鼠不同，我们通过流式细胞术测试了s的1表达。结果表明，中s上1的平均荧光强度从在细胞接种后的第一周38681009u逐渐增加到第四周的1，06801218u，这表明1在我们模型中的中具有潜在作用。

在脾脏和骨髓中，随着肿瘤的发展，s的比例也显著增加，其模式与肿瘤组织和外周血中的s相同。此外，我们在小鼠中观察到明显的脾肿大，这与我们观察到的s在脾内聚集一致。

为了确定局部照射对肿瘤生长和s的影响，当肿瘤直径达到75时，我们使用大分割治疗皮下肿瘤。放疗导致肿瘤进展延迟长达一周，在第7至第10天的最小体积约为5003，但此后肿瘤开始再生。根据放疗前后肿瘤生长曲线，我们选择放疗后第3天为再生前生长，放疗后1周为肿瘤体积最小时为再生开始，放疗后2周和3周为再生阶段。肿瘤组织苏木精伊红染色显示，与未治疗的肿瘤相比，放疗后的肿瘤中有更多的浸润性炎症细胞。随后的11b特异性免疫组化染色显示，大多数炎症细胞是11b髓系细胞，这表明局部照射可能导致s的积累。为了证实我们的假设，我们在局部照射后的不同时间点对总s和这两个亚群进行了流式细胞术分析。局部照射后，放疗后肿瘤浸润s的比例比未治疗肿瘤高2倍。s与总s具有相同的增加趋势，而比例保持在约01，且与肿瘤大小和治疗无关。外周血情况同肿瘤组织。

为了确定受照射肿瘤中的逐渐积累是否有助于肿瘤的再生长，或者这种积累是否仅仅是肿瘤生长的结果，使用抗y6单克隆抗体来消耗抗y6抗体的应用显着降低了肿瘤部位和外周血中的频率。此外，用抗y6抗体治疗大大延迟了照射后的再生，这表明的募集对肿瘤再生至关重要。

虽然s利用一系列机制来抑制抗肿瘤免疫反应，这涉及到许多免疫细胞和细胞因子，但对8细胞的抑制无疑是最重要的。为了确定后s诱导的免疫抑制是否依赖于8细胞，我们通过流式细胞术评估了8细胞的数量和功能。

如图3所示，8细胞的百分比随着照射从1171231下降到242062。耗竭逆转了这种下降。为了更好地了解8细胞浸润肿瘤部位的功能状态，我们测量了8细胞内部和表面上、28和1的表达。局部显着降低了8细胞分泌的比例，从3306453降至1325208，并增加了表达1的8细胞的比例u，&p;p;lt;005。

28表达未观察到显着变化。当抗y6抗体被给予辐照小鼠时，分泌达到与未处理的小鼠相同的水平，而与辐照小鼠进行比较抗y6抗体处理后的1表达没有变化小鼠。因此，在这部分我们建议s通过抑制8细胞促进放疗后肿瘤的再生。s不仅抑制了中8细胞的数量，而且还抑制了其活性。

为了确定辐照诱导s的抑制机制，我们进行了免疫组化染色及i和1活性检测。肿瘤切片的免疫组化染色显示，局部增强了1的表达，但没有增强i的表达。1活性测定表明，局部照射显著提高了1的活性，从040015提高到378039。相比之下，荧光标记的i活性检测显示，辐照和未处理的肿瘤组织样本的荧光强度相似。

1的表达是s的一种新型免疫抑制机制。然后我们询问1上调是否是后s介导的免疫抑制的机制之一。通过流式细胞术分析辐照后中1的表达。图4显示，与未处理组相比，受照射肿瘤的中的1表达在照射后不久显着增加然而，此后1表达继续下降，局部照射组在照射后第3周显着低于未治疗组。外周血中s的1表达与局部肿瘤部位的表达趋势相同。

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